《植物生理学报》 2007, 43(5): 821-826

紫茎泽兰类黄酮3'- 羟化酶基因的克隆、序列分析和原核表达

黄文坤^1,2，程红梅³，郭建英¹，高必达²，万方浩^1,*

1 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100094；2 湖南农业大学生物安全科学技术学院, 长沙410128；3 中国农业科学院生物技术研究所, 北京100081

通信作者：万方浩；E-mail: wanfangh@public3.bta.net.cn；Tel: 010-68975297

摘　要：

用基因特异引物对紫茎泽兰 F3'H 基因进行 PCR 扩增、T-A 克隆及测序，采用 DNAMAN 5.0 和 MEGA 3.0 等生 物信息学软件进行序列分析，并对 F3'H 基因的组织表达特性及原核表达产物进行了分析。结果表明紫茎泽兰 F3'H 基因 cDNA 全长为 1 722 bp (GeneBank 登录号 EF137714)，编码 570 个氨基酸，与翠菊、大豆和非洲菊 F3'H 基因的氨基酸序 列同源性分别为 64.4%、57.3% 和 54.5%。Southern 杂交表明该基因为单拷贝。Northern 杂交表明 F3'H 基因在紫茎泽兰叶 中表达量最高，且其表达受泽兰酮诱导。SDS-PAGE 电泳表明 F3'H 基因经 IPTG 诱导后在大肠杆菌中能表达 56.8 kDa 的 目的蛋白。

关键词：类黄酮 3'- 羟化酶；紫茎泽兰；入侵植物；基因克隆；原核表达

收稿：2007-05-11   修定：2007-08-28

资助：国家“973”计划(2002CB111400)。

紫茎泽兰类黄酮3'- 羟化酶基因的克隆、序列分析和原核表达

黄文坤^1,2，程红梅³，郭建英¹，高必达²，万方浩^1,*

1 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100094；2 湖南农业大学生物安全科学技术学院, 长沙410128；3 中国农业科学院生物技术研究所, 北京100081

Corresponding author: ; E-mail: wanfangh@public3.bta.net.cn; Tel: 010-68975297

Abstract:

用基因特异引物对紫茎泽兰 F3'H 基因进行 PCR 扩增、T-A 克隆及测序，采用 DNAMAN 5.0 和 MEGA 3.0 等生 物信息学软件进行序列分析，并对 F3'H 基因的组织表达特性及原核表达产物进行了分析。结果表明紫茎泽兰 F3'H 基因 cDNA 全长为 1 722 bp (GeneBank 登录号 EF137714)，编码 570 个氨基酸，与翠菊、大豆和非洲菊 F3'H 基因的氨基酸序 列同源性分别为 64.4%、57.3% 和 54.5%。Southern 杂交表明该基因为单拷贝。Northern 杂交表明 F3'H 基因在紫茎泽兰叶 中表达量最高，且其表达受泽兰酮诱导。SDS-PAGE 电泳表明 F3'H 基因经 IPTG 诱导后在大肠杆菌中能表达 56.8 kDa 的 目的蛋白。

Key words: 类黄酮 3'- 羟化酶；紫茎泽兰；入侵植物；基因克隆；原核表达